将供试品注入微生物限度培养器内,通过检验仪自带内置进口隔膜液泵负压抽滤,将供试品中微生物截留在滤膜上,用取膜器取出滤膜,转移至配置好的固体培养基上,菌面朝上,平贴。盖上盖子形成封闭的培养盒,置于相应的恒温培养箱内培养并计数。
微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作,防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
1.实验前
1.1实验用工器具的准备:检测过程中用到的玻璃平皿需灭菌(湿热灭菌121℃、30分钟或干热灭菌160℃、2小时)备用;剪刀、镊子等需先用纱布包好,外包牛皮纸包好扎紧,灭菌(湿热灭菌121℃、30分钟);移液管、枪头等用报纸包好扎紧,灭菌(湿热灭菌121℃、30分钟)。
1.2培养基及稀释液的准备:根据检验样品,计算出培养基与稀释液的用量,按照比例进行配置,包好,根据培养基与稀释液的属性,进行湿热灭菌,备用。
1.3洁净服准备:将当天所用洁净服放入灭菌锅中进行灭菌,备用;或使用已灭菌且在有效期内的洁净服。
1.4确保实验洁净区域通风,观察洁净室各个规定区域的压差是否符合规定,若不符合,及时通知设备部门,进行调整。
2.实验中
2.1将实验所需的平皿、培养基、工器具、稀释液放入传递窗中,打开紫外灯,照射30分钟。
2.2进入洁净区域,手清洁消毒,换上洁净服,进入检查室,打开洁净工作台通风,用消毒剂擦拭台面,取出传递窗中照射后物品,按照使用先后顺序置于洁净工作台上,摆好后紫外照射30分钟,人员退出检查室,紫外照射结束后,继续通风30分钟,检测人员方可进入检查室进行实验。
2.3实验过程中需点酒精灯,拆开灭菌后包好的培养基外层,在近火焰处轻微灼烧培养基瓶口,打开瓶盖,倾倒培养基至灭菌后的平板中,待冷凝后使用。
3.实验后
3.1清洁及:做完实验后,用消毒剂对操作台面进行擦拭消毒,待实验培养物和实验废弃物传出洁净区域后,使用纯化水对地面进行清洁。
3.2培养及结果观察:需氧菌平板应在30-35℃下,培养3-5天,霉菌与酵母菌平板应在20-25℃下,培养5-7天,空白与阴性对照应无菌生长。